Protein A/G agarose Beads

【产品简介】
本产品 Protein A/G Agarose Beads 是将重组Protein A/G 蛋白分子共价交联到 4%琼脂糖胶粒上，再使用特殊试剂对琼脂糖胶粒表面进行封闭处理，降低了胶粒表面对杂蛋白的非特异性吸附。

Protein A/G Agarose Beads分散在含有 0.01%叠氮化钠的 PBS 缓冲液中，用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究。1 ml 包装内含有 0.5 ml Beads，可进行 50 次常规的免疫沉淀试验。

【使用说明】

A.样品的制备：
1. 对于 100 mm 培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，使用预冷 PBS 洗涤一次后加入 2毫升细胞裂解液裂解细胞。对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS 洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注：详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考 100mm 培养皿的裂解液的用量进行裂解。裂解液最终蛋白浓度选择在 0.5-1 μg/μl 范围内较为合适。

B.去除非特异性结合（可省略）：

2. 取 200 微升至 1 毫升蛋白样品，加入约 1 微克和免疫沉淀时使用的 IgG 种属相同的普通 IgG（nomal IgG）和 20 微升充分重悬的 Protein A/G Agarose Beads，4℃缓慢摇动 30 分钟。

3. 2500rpm(约 1000 g)离心 5 分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：现在已经知道，哺乳动物细胞内有多种成分可以和 IgG 发生结合，可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带。使用 normal IgG 和Protein A/G Agarose Beads 对裂解液进行封闭预处理，可以降低后续实验的非特异性吸附。

C.免疫沉淀：
4. 加入 0.2-2 微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动 1 小时。

5. 再加入 20 微升充分重悬的 Protein A/G Agarose Beads，4℃缓慢摇动 1-3 个小时。(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的 Protein A/G Agarose Beads 的量调整为 40 微升。)

6. 2500rpm(约 1000g)离心 5 分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉 Protein A/G Agarose Beads。

7. 用准备蛋白样品时的裂解液或 PBS 洗涤沉淀 4 次，裂解液或 PBS 的用量每次为 0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤 3。

8. 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入 20-40 微升 1XSDS-PAGE 电泳上样缓冲液 Vortex
重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。

9. 100℃或沸水浴处理 3-5 分钟，取部分或全部样品用于 SDS-PAGE 电泳。